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細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI 

貨號(hào)： CA1020
規(guī)格： 20T/50T/100T
保存：貯存于 2-8°C，復(fù)檢期為一年。建議 Annexin V-FITC 打開(kāi)后，分裝成小份凍存于-20°C。
產(chǎn)品說(shuō)明：細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面都起到十分重要
的作用。 Annexin V 是一種分子量為 35.8 KD 的 Ca2+
依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過(guò)程中翻轉(zhuǎn)到膜外的
磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）高親和力特異結(jié)合。FITC-Annexin V 結(jié)合到凋亡細(xì)胞后，在藍(lán)色光的
激發(fā)下，發(fā)出綠色熒光，區(qū)分出凋亡細(xì)胞與正常細(xì)胞。碘化丙啶（Propidium  iodide，PI）是一種核酸染料，
它不能穿透完整細(xì)胞膜，但對(duì)凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞的破損細(xì)胞膜能夠穿透，并使細(xì)胞核紅染。將
FITC-Annexin V 與 PI 匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI操作步驟: 
 1.  調(diào)整待測(cè)細(xì)胞的濃度為 5×10五次方-1×10六次方個(gè)/ml。
 2.  取 1ml 細(xì)胞，1000rpm，4℃離心 10 分鐘，棄上清。
 3.  加入 1ml 預(yù)冷的 PBS，輕輕震蕩使細(xì)胞懸浮，1000rpm，4℃離心 10 分鐘，棄上清（對(duì)于貼壁細(xì)胞，先用胰酶消化，再用 PBS 洗滌）。
 4.  重復(fù)步驟 3 兩次。
 5.  將細(xì)胞重懸于 200µl Binding Buffer。
 6.  加入 10µl Annexin V-FITC 和 10µl PI，輕輕混勻，避光室溫反應(yīng) 15 分鐘  或 4℃反應(yīng) 30  分鐘。
 7.  加入 300µl Binding Buffer，在 1 小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
 8.  若用熒光顯微鏡檢測(cè)，將細(xì)胞混合液離心，取細(xì)胞沉淀涂片，再進(jìn)行觀察。
注意事項(xiàng):  : :  : 
為保證得到理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果在使用此試劑盒之前請(qǐng)認(rèn)真閱讀該注意事項(xiàng)。
 1.旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
 2.Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物質(zhì)，在保存與操作時(shí)請(qǐng)注意避光。
 3.Propidium iodide（PI）能通過(guò)皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用。
 4.在細(xì)胞洗滌的后一步，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免 PBS 殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
 5.PI 染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高，建議行 Annexin V-FITC 染色，上機(jī)前 5 分鐘再
加入 PI 染色。
產(chǎn)品內(nèi)容: :: :  CA1020-20  CA1020-50  CA1020-100
Annexin V-FITC  200µl  500µl  1000µl
Binding   Buffer  12ml  30ml  60ml
Propidium iodide(PI)  200µl  500µl  1000µl
 6.整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在 4℃下操作。
 7.反應(yīng)完畢后請(qǐng)盡快檢測(cè)，因?yàn)榧?xì)胞凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程，反應(yīng) 1 小時(shí)后熒光強(qiáng)度就開(kāi)始衰變。
 8.成功的檢測(cè)凋亡受以下幾種因素的影響，如細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞膜上 PS 的密度、發(fā)生凋亡時(shí) PS 翻轉(zhuǎn)的比
例、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方法、所用試劑、誘導(dǎo)凋亡的時(shí)間等，把這些影響因素進(jìn)行優(yōu)化對(duì)實(shí)驗(yàn)成功是非常必要
的。
此試劑盒僅供科研使用。

相關(guān)產(chǎn)品：
P1020    1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M
T1300    胰蛋白酶－EDTA 消化液(0.25%)不含酚紅
T1350    胰蛋白酶消化液(0.25%)不含酚紅
24800     通用細(xì)胞凍存液
12100   DMEM(H)
31800   RPMI Medium 1640
CA1040   一步法 TUNEL 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)
S1056     細(xì)胞凋亡熒光 Hoechst 33342-PI 雙染試劑盒