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TEV 蛋白酶

(重組型)是經(jīng)過(guò)基因工程改造后的重組蛋白酶，該酶特異性識(shí)別Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe- Gln-Gly七氨基酸序列。rTEV蛋白酶與腸激酶U(EK)Thrombin、Factor Xa、SUMO等蛋白酶相比，具有高活性、高特異性的雙重特點(diǎn)，rTEV蛋白酶因具有高剪切活性和特異性，已成為融合蛋白表達(dá)后去除融合tag的蛋白酶。該酶經(jīng)6×His標(biāo)簽純化而得(含組氨酸標(biāo)簽)，純度達(dá)99％，剪切反應(yīng)完畢后可通過(guò)Ni-NTA Resin(Cat.No.P2010,  Solarbio)去除。該酶在2-8℃-30℃溫度、pH范圍
(6.0-8.5)反應(yīng)條件下均具有活性(見(jiàn)下表)。不同溫度下剪切活性(%)
       4℃  16℃  21℃ 30℃
0.5 h   34  58    56   70
1 h     58  80    78   90
2 h     71  99    99   99
1 h     84  99    99   99
組分與保存條件:
組分名稱                數(shù)量       保存
rTEV 蛋白酶(10 U/μl)  100μl     -70℃/-20℃
20XrTEV Buffer          1 ml       -20℃
活性定義:在1XrTEV Buffer(50 mM，pH8.0, 0.5 mM EDTA, 1mM DTT)，30℃反應(yīng)1h，剪切>85％的3 μg底物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。
保存條件:長(zhǎng)期儲(chǔ)存-70℃，可儲(chǔ)存1年，-20℃，可儲(chǔ)存6個(gè)月。

使用方法說(shuō)明：
1. 推薦使用溶液：50 mM NaH2PO4, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 10%甘油，pH 8.0 buffer中進(jìn)行剪切。
2. 250×rTEV Protease Buffer：250mM EDTA, 250 mM DTT, PH 8.0
3.  蛋白酶與需要酶切的目的蛋白比例：1：100
4. 酶切體系：

融合蛋白 1000 μg
250×rTEV Protease Buffer 4μL
r 蛋白酶 2μL
定容 1000μL
定容緩沖液：50 mM NaH2PO4, 150mM NaCl
5. 酶切條件：在 16℃酶切 6hr。用戶可以根據(jù)自己研究的目的蛋白進(jìn)行摸索酶切條件，可適當(dāng)加大酶量或延長(zhǎng)酶切時(shí)間。
6. 可取少量樣本進(jìn)行 SDS-PAGE 分析，若要去除酶切后體系中的蛋白酶，可用 His 標(biāo)簽純化樹脂親和層析。

參考文獻(xiàn)：

《CRISPR-Cas9 Mediated RNase L Knockout Regulates Cellular Function of PK-15 Cells and Increases PRV Replication》 作者:Chao Sui, Dandan Jiang, Xiangju Wu, Xiaoyan Cong, Feng Li, Yingli Shang, Jinqiu Wang, Sidang Liu, Hu Shan, Jing Qi, and Yijun Du 期刊:BioMed Research International 影響因子:2.197 PMID:30941371