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通用RT-PCR試劑盒（AMV）

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒適用于各種 RNA 制品的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)以及隨后的 PCR 擴(kuò)增。它采用 AMV 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，能夠獲得更長(zhǎng)的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。同時(shí)，在 25ul 反轉(zhuǎn)錄體系和 50ul PCR 反應(yīng)體系中，還可以一次性得到足夠量的 PCR 產(chǎn)物用于后續(xù)的克隆實(shí)驗(yàn)。本試劑盒中配置的酶均為進(jìn)口的酶。RT 酶采用進(jìn)口的 AMV，所以 cDNA 更長(zhǎng)，基因的信息保留得更完整！反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中特異的 RNase 抑制劑可有效降低由于外源 RNase 污染而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于 cDNA 克隆及目的基因檢測(cè)等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：

一、反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

1、在冰浴的無(wú)菌無(wú) RNase 的離心管中加入如下反應(yīng)成分： 0.5ug RNA 模板 5ul Oligo(dT)16引物補(bǔ) RNase-free ddH2O 11.5ul 2、70℃保溫 5min 后迅速在冰上冷卻 5min，簡(jiǎn)短離心收集反應(yīng)液后加入以下各組分： 5ul 5×AMV Buffer 2.5ul dNTPs 0.5ul RNasin 0.5ul AMV 補(bǔ) RNase-free ddH2O 25ul 3、42℃溫浴 60min，如果是用隨機(jī)引物，請(qǐng)將離心管置 37℃溫浴 60min。 4、反應(yīng)后將離心管置冰上，反應(yīng)產(chǎn)物可用于進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-20℃保存。

二、PCR 反應(yīng)

1、按以下各組分配制 50ul PCR 反應(yīng)體系： 10×PCR Buffer 5ul dNTPs 1ul 上游引物（用戶(hù)自備 10um） 1ul 下游引物（用戶(hù)自備 10um） 1ul RT 反應(yīng)產(chǎn)物 2ul Taq Polymerase 0.5ul ddH2O x ul Total Volume 50ul 2、混勻后短暫離心，PCR 儀擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。注意事項(xiàng)： 1、用于 cDNA 合成反應(yīng)的相關(guān)試劑和耗材盡可能用 DEPC 進(jìn)行處理，并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時(shí)，先用經(jīng)過(guò)滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進(jìn)行過(guò)濾除菌處理。 2、RNA 樣品要避免反復(fù)多次凍融，應(yīng)使 RNA 在冰浴中處于融化狀態(tài)。 3、如果 PCR 效果不理想，可以適當(dāng)優(yōu)化條件，比如改變退火溫度或增加模板量。相關(guān)產(chǎn)品： R1600 DEPC 處理水 SR0060 液相 RNase 清除劑 R1200 總 RNA 提取試劑盒 SR0080 RNAsaver RNA 長(zhǎng)效保存液 R1050 5×RNA Loading Buf er RP1100 通用 RT-PCR 試劑盒(M-MLV) PC2440 Random PC2450 Oligo T16 D1020 10×DNA 上樣緩沖液 T1060 50×TAE 緩沖液

通用RT-PCR試劑盒（AMV）