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產(chǎn)品介紹：
尿嘧啶DNA糖苷酶（UNG）來(lái)源于大腸桿菌重組克隆表達(dá)，分子量為25kDa，可催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈DNA釋放游離尿嘧啶。UNG酶對(duì)RNA無(wú)活性，主要應(yīng)用于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的防污染。其作用原理基于：如果在PCR反應(yīng)中以dUTP替代dTTP摻入DNA中，形成了含dU堿基的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，該酶能選擇性斷裂單鏈和雙鏈DNA中U堿基的糖苷鍵，降解該P(yáng)CR擴(kuò)增產(chǎn)物。

規(guī)格：1U/μl

儲(chǔ)存緩沖液：
20mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，150mM NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，0.05% Tween20，50%glycerol.

試劑組成：

10×Reaction Buffer：200mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，100mM NaCl，10mM EDTA，1mg/ml BSA.

活性定義：
37℃條件下，1小時(shí)降解1μg含dU堿基的單鏈DNA的酶量為1單位。

保存條件：
每天或每周使用保存于-20℃。長(zhǎng)期儲(chǔ)存應(yīng)保存于-70℃保存，并嚴(yán)格避免-70℃保存時(shí)反復(fù)凍融。

質(zhì)量控制：

1、SDS-PAGE電泳純度大于98%；

2、1U UNG在 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模版應(yīng)*降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。

3、無(wú)核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶活性、RNase酶活性；

（1）SDS-PAGE 銀染純度大于98%

（2）UNG 酶消化能力試驗(yàn)

    以700bp含dUTP的不同拷貝數(shù)基因片段為模板，分別加入含0.5U UNG酶的50μl PCR反應(yīng)體系，50℃ 消化2min，94℃ 滅活4min后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

A. Biori UNG

B. Promega UNG

Lane 1：Negative control （no template）；

Lane 2：positive control（no UNG）；

Lane 3~lane 10: 103 to 1010 copies of template 

結(jié)果表明，我們的UNG酶與Promega UNG酶消化效果相當(dāng)，均可以有效控制108拷貝以下含有U-DNA的模板的污染。

（3）UNG酶穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

將UNG酶置于37℃進(jìn)行7天加速試驗(yàn)。以含dUTP的（106、107、108、109 copies/ml）基因?yàn)槟０?，采用?/span>dUTP的體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，50μl反應(yīng)體系加入0.5U UNG酶，于50℃消化2min，94℃滅活4min；然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。以Promega公司UNG酶為對(duì)照，考察UNG酶對(duì)模板的消化效果。

1：negative（No template）； 

2～9：postive （104、105、106、107、108、109、1010、1011 copies /ml， No UNG）；

10～14：control Promega UNG（106、107、108、109、1010 copies /ml）；

15～19：Sample UNG（106、107、108、109、1010 copies/ml）。

1～4：Sample UNG（106、107、108、109 copies/ml）；

5～8：Control Promega UNG（106、107、108、109 copies/ml）； 

9：negative （No template）；

10～13：Postive （106、107、108、109 copies/ml，No UNG）。

結(jié)果表明，我們的UNG酶與Promega UNG酶穩(wěn)定性相當(dāng)，均可以在37℃加速7天，仍保持對(duì)107copies/ml含dUTP模板的消除能力。

反應(yīng)條件：

1、Incubate the product for 2 min at 50℃；

2、Inactivate UNG by heating to 95℃ for 5 min.

注意事項(xiàng)：
1、避免多次凍融，切勿暴露在溫度波動(dòng)較大之處。溫度波動(dòng)對(duì)產(chǎn)品的穩(wěn)定性有極大影響。

2、尿嘧啶DNA糖基酶可以在PCR反應(yīng)前清除不慎污染的U-DNA分子。為有效防止污染，一個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須在所有的PCR反應(yīng)中均使用dUTP作為dNTPs組分之一進(jìn)行擴(kuò)增，使所有擴(kuò)增產(chǎn)物都成為U-DNA。

3、由于不同基因堿基組成不同，因此有些基因?qū)?/span>UNG酶殘留活性十分敏感，如發(fā)現(xiàn)使用UNG 酶影響擴(kuò)增靈敏度，可以嘗試降低UNG酶的用量或?qū)Ψ磻?yīng)體系中dTTP與dUTP的比例進(jìn)行調(diào)整。推薦使用我公司生產(chǎn)的TS-UNG，該酶滅活更加*，可以大大簡(jiǎn)化上述試驗(yàn)過程。